化妝品防腐效能試驗(yàn)檢測(cè)——CFFA方法
2017-01-18 10:32:21
天緯化學(xué)
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列出了用于化妝品防腐效能試驗(yàn)中的常用微生物,其中包括了與眼部有聯(lián)系的細(xì)菌,這些細(xì)菌是從眼部區(qū)域天然存在的微生物區(qū)系,或從臨床上分離出來(lái)的,或從污染的產(chǎn)品中分離獲得的。防腐效能試驗(yàn)中常用的細(xì)菌培養(yǎng)基包括NA、TSA(水解大豆瓊脂培養(yǎng)基)、EA(瓊脂培養(yǎng)基)。適宜于真菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基包括SDA(糊精瓊脂培養(yǎng)基)、PDA(馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基) 或MA(瓊脂培養(yǎng)基)。當(dāng)菌體生長(zhǎng)好后,可將細(xì)菌或酵母菌于5℃下斜面保存,霉菌可在室溫下斜面保存。每隔一定時(shí)間(一周或一個(gè)月)進(jìn)行傳代來(lái)保持菌種的生存,但頻繁傳代會(huì)使菌種的某些特性丟失或減弱微生物的抗性,冷藏或冷凍干燥保存微生物是一種取代斜面保存的方法,因?yàn)樗朔祟l繁傳代的缺點(diǎn),保證了遺傳性狀的穩(wěn)定性。還應(yīng)注意的是在沒(méi)有選擇壓力的情況下由于頻繁傳代抗性更易喪失。在含有防腐劑的化妝品中分離出來(lái)的微生物,可能仍然保留著對(duì)防腐劑的抵抗力。
在準(zhǔn)備接種物時(shí),可以用肉湯或瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌和酵母菌,收獲的菌體用于微生物檢驗(yàn)。在進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí),一般取20g或20ml樣品,微生物的接種濃度控制在1×10cfu細(xì)菌ml(或g)產(chǎn)品,或1×10cfu酵母菌ml(或g)產(chǎn)品。為了獲得每種或每一類群微生物的試驗(yàn)數(shù)據(jù),CTFA傾向于使用純培養(yǎng)物或相當(dāng)類似的微生物來(lái)接種,體積不應(yīng)超過(guò)總體積的1%,這些檢驗(yàn)水平提供了比通常消費(fèi)者使用可能性更高的細(xì)菌污染機(jī)會(huì)。加之,在產(chǎn)品設(shè)計(jì)時(shí)許多產(chǎn)品還有保護(hù)性體系,即加入略多一些的防腐劑,因此,大多數(shù)經(jīng)檢驗(yàn)后確定的防腐劑濃度保證了產(chǎn)品可以在消費(fèi)者使用期間抵抗污染,而且比它們的一般要求嚴(yán)格得多。樣品一旦接種,實(shí)驗(yàn)人員就會(huì)將其與被測(cè)產(chǎn)品徹底混合,同時(shí),取出樣品在適宜的中和性肉湯中稀釋,從而使防腐劑失去效力。大多數(shù)方法采用1g或1ml混合物傾注平板培養(yǎng)。有些實(shí)驗(yàn)室使用選擇
性平板涂布方法來(lái)估計(jì)微生物的數(shù)量。那些對(duì)溫度敏感的微生物則可采用涂布的方法、一般來(lái)講細(xì)菌的培養(yǎng)溫度為32℃--35℃真菌采用25℃--30℃培養(yǎng)。多數(shù)試驗(yàn)方法(CTFA,USP,ASTM等)推薦混合測(cè)試的樣品分別于0、1、2、3天(僅用于眼部的化妝品)、7、14和28天觀察微生物的生長(zhǎng)情況。有些檢驗(yàn)可能多于28天,這依賴于其所期望的使用范圍。有些產(chǎn)品還進(jìn)行重復(fù)性的防腐試驗(yàn)來(lái)估計(jì)防腐劑在產(chǎn)品中的適應(yīng)性,用某一特定的微生物防腐試驗(yàn)可以得出使防腐系統(tǒng)失去效力所需的檢驗(yàn)次數(shù)。CTFA所推薦的含有中和劑的稀釋培養(yǎng)基有:LBL,LBLT,TGB或WB.當(dāng)使用傾注平板法培養(yǎng)時(shí),加入培養(yǎng)基中的卵磷脂或吐溫—80就可以中和絕大多數(shù)的防腐劑,并使產(chǎn)品均勻分布,對(duì)細(xì)菌、酵母和真菌來(lái)講,letheen.瓊脂培養(yǎng)基是最常使用的培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基還適用于厭氧菌的生長(zhǎng),對(duì)于中和季銨鹽類化合物十分有效。其他的CTFA推薦的培養(yǎng)基有:TSA(大豆酪蛋白水解物培養(yǎng)基),NA(營(yíng)養(yǎng)瓊脂),TA(硫代乙醇酸瓊酯),混合瓊脂( 腦、心、小牛肉的混合物),EA,TGYEA(胰胨B葡萄糖B酵母提取物瓊脂),TCG-YEA(胰蛋白酶水解物B葡萄糖B酵母提取物瓊脂,D-E培養(yǎng)基,以及TSAPL(含卵磷脂和吐溫80的胰蛋白酶大豆水解瓊脂);其他還有使真菌富集的培養(yǎng)基,如右旋葡萄糖瓊脂,Mycophil瓊脂,Mycological瓊脂和Eugon-gar。當(dāng)劃線培養(yǎng)時(shí),中和劑和瓊脂培養(yǎng)基相混,多數(shù)使用的是lb瓊脂培養(yǎng)基,如果防腐劑是汞或其他重金屬,則應(yīng)采用硫代乙醇酸的培養(yǎng)基。
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