化妝品防腐效能試驗(yàn)檢測(cè)幾種方法的比較
2017-01-19 08:23:04
天緯化學(xué)
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化妝品防腐效能試驗(yàn)檢驗(yàn)方法有 CFFA方法、ASTM法、USP XXⅡ方法等， 比較了上述三種方法，它們?cè)谠O(shè)計(jì)和應(yīng)用上是相似的，這些方法的主要區(qū)別在于接種物的不同（ 純培養(yǎng)或混合培養(yǎng)） 和培養(yǎng)方法的區(qū)別（ 傾注法或涂布法）。這種區(qū)別會(huì)給結(jié)果造成一定的差異，但在具體使用任何一種方法時(shí)，都應(yīng)有適當(dāng)?shù)挠行澡b定作為支持，有效性鑒定包括接種物存活力、抗防腐劑能力以及防腐檢測(cè)試驗(yàn)中稀釋劑的影響及微生物的恢復(fù)等。USP法應(yīng)用于原始未開封的，以水為基質(zhì)或載體的，用于耳、鼻、眼部的產(chǎn)品中真菌的檢測(cè)；CTFA方法是大多數(shù)企業(yè)防腐性能檢測(cè)中使用的方法，特別是將化妝品分為劣、中、優(yōu)等保藏時(shí)，CTFA方法具有特別的意義。多數(shù)生產(chǎn)者所作的防腐性能檢測(cè)試驗(yàn)應(yīng)比普通微生物檢測(cè)試驗(yàn)使用更寬的試驗(yàn)微生物范圍，從而使產(chǎn)品有更大的安全空間。研究表明，大多數(shù)生產(chǎn)者所做的防腐檢測(cè)試驗(yàn)真實(shí)地模仿了產(chǎn)品在消費(fèi)者使用或誤用的范圍內(nèi)所受到的微生物浸染狀況。他們把產(chǎn)品涂在消費(fèi)者的手上持續(xù)一段時(shí)間，然后再測(cè)定微生物數(shù)量。結(jié)果表明經(jīng)這種防腐性能檢測(cè)試驗(yàn)設(shè)計(jì)出的產(chǎn)品不會(huì)對(duì)消費(fèi)者造成污染，可以被完好地保存。由于菌種的生理狀態(tài)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性有著很大的影響，所以對(duì)菌種的準(zhǔn)備是一個(gè)必須考慮的因素。Peter Ｇilber的實(shí)驗(yàn)表明，大量微生物的表型變化是由于其在營(yíng)養(yǎng)缺乏條件下生長(zhǎng)造成的。如在對(duì)數(shù)期晚期和穩(wěn)定期早期發(fā)生的那樣。
在上述的方法中，微生物的保存和收集方法也有所不同。所有方法都強(qiáng)調(diào)要將溶液調(diào)整到常用培養(yǎng)基的PH或離子強(qiáng)度，微生物細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基要比其懸浮在不適的PH或滲透壓的溶液中為好，因?yàn)榕囵B(yǎng)基可以抑制一些毒素的作用。Orth 發(fā)現(xiàn)，接種時(shí)使用肉湯較生理鹽水來(lái)說(shuō)，降低了微生物的死亡率。這可能是由于肉湯培養(yǎng)基充當(dāng)了防腐劑鈍化劑的角色。
（1）接種物的準(zhǔn)備。細(xì)菌懸浮液的稀釋應(yīng)在適宜的環(huán)境下進(jìn)行。與濃度高的懸浮液相比，稀釋后的懸浮液的細(xì)胞對(duì)環(huán)境更敏感，更易受傷害，但微生物細(xì)胞處于緩沖液中可以防止PH的劇烈變化。在前述方法中，ASTM建議使用無(wú)菌水將菌種從移接后的斜面上洗下來(lái)，USP建議使用無(wú)菌生理鹽水，CTFA并沒(méi)有做特別的規(guī)定。
在對(duì)細(xì)菌、酵母、霉菌的接種水平要求方面，ASTM方法比較特別。它推薦了某種特定的分光光度計(jì)、比色管和吸收波長(zhǎng)來(lái)控制接種物的濃度。USP和CTFA都無(wú)此規(guī)定，這兩種方法只要求一個(gè)最終的接種水平。上述三種方法的接種水平是不同的，ASTM方法規(guī)定接種前的濃度為1千萬(wàn)細(xì)胞/ml，酵母菌和霉菌的懸浮液濃度為1百萬(wàn)細(xì)胞/ml,USP 規(guī)定的細(xì)胞濃度或孢子濃度均為1千萬(wàn)細(xì)胞/ml，而CTFA沒(méi)有作具體規(guī)定。 （2）純培養(yǎng)和混合培養(yǎng)。ASTM建議的接種方式為純培養(yǎng)或混合培養(yǎng)，而CTFA和USP采用的是典型的純培養(yǎng)方式。混合培養(yǎng)可以更準(zhǔn)確地反應(yīng)經(jīng)消費(fèi)者使用產(chǎn)品后的污染情況，純培養(yǎng)比混合培養(yǎng)可顯示出對(duì)防腐劑更多的抵抗性。值得注意的是，當(dāng)采用混合培養(yǎng)時(shí)，所用的微生物應(yīng)當(dāng)有聯(lián)系，如：革蘭氏陽(yáng)性（G+）細(xì)菌，革蘭氏陰性（G-）細(xì)菌。三種防腐劑檢驗(yàn)的方法都規(guī)定了取樣量，同時(shí)ASTM和USP還對(duì)所取 樣品的保存條件進(jìn)行了規(guī)定。三種方法都要求在接種后的第0、7、14 和28天取樣分析結(jié)果，CTFA還建議對(duì)眼部的化妝品在1、2和3天后取樣分析結(jié)果。據(jù)CTFA和ASTM規(guī)定，7天后所生長(zhǎng)的細(xì)菌數(shù)應(yīng)達(dá)到3個(gè)對(duì)數(shù)水平或有99.9%的減少，USP規(guī)定14天后達(dá)到這個(gè)水平，CTFA要求酵母和絲狀真菌在第7天時(shí)應(yīng)減少90%，ASTM則允許在第28天后達(dá)到此水平。USP僅規(guī)定14天后酵母和絲狀真菌保持或低于初始接種量的0.5個(gè)對(duì)數(shù)水平。
ASTM還建議在第8天用同樣的微生物再進(jìn)行防腐效能實(shí)驗(yàn)。它可以為我們提供更多消費(fèi)者在使用產(chǎn)品時(shí)有價(jià)值的信息，比如在對(duì)潤(rùn)膚露和睫毛膏這種使用頻率較高的化妝品進(jìn)行污染評(píng)價(jià)時(shí)，這種實(shí)驗(yàn)就顯得更為重要。
（3）產(chǎn)品合格標(biāo)準(zhǔn)USP法認(rèn)為如果產(chǎn)品能做到以下幾個(gè)方面，就說(shuō)明防腐劑系統(tǒng)有效： 1.在14天內(nèi)存活菌數(shù)達(dá)到初始菌數(shù)的0.1%； 2.酵母菌和霉菌沒(méi)有菌絲生長(zhǎng)；
3.在28天保存試驗(yàn)中所有測(cè)試的微生物都保持或低于所設(shè)計(jì)的微生物水平。 （4）CTFA方法認(rèn)為如果產(chǎn)品能做到以下幾個(gè)方面，就說(shuō)明防腐劑系統(tǒng)有效： 1.在測(cè)試樣品保存7天內(nèi)細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)減少99.9%以上，并在試驗(yàn)期間繼續(xù)減少； 2.酵母菌和霉菌應(yīng)減少90%以上，并在試驗(yàn)期間繼續(xù)減少； 3.在整個(gè)試驗(yàn)期間可抑制芽孢的萌發(fā)。
利用線性回歸方法，若產(chǎn)品滿足下列指標(biāo)，即可認(rèn)為達(dá)到防腐的要求。對(duì)致病菌來(lái)講D值＜4h，對(duì)非致病菌、酵母菌、霉菌D值＜28h，產(chǎn)品能抑制芽孢的萌發(fā)。
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